高效液相色譜儀的正確使用和科學(xué)保養(yǎng)：

一、保持貯液瓶清潔。對(duì)專用貯液瓶應(yīng)定期清洗，用試劑瓶作貯液瓶時(shí)要經(jīng)常更換。

二、定期（如半個(gè)月）在4～6M稀硝酸溶液中超聲清洗過(guò)濾器，保持過(guò)濾器暢通無(wú)阻。

三、使用HPLC級(jí)試劑和新蒸二次蒸餾水作流動(dòng)相，所用溶劑的截止波長(zhǎng)一定要低于檢測(cè)波長(zhǎng)，對(duì)不是HPLC級(jí)的試劑要進(jìn)行過(guò)濾（HPLC試劑出廠前已用0.02µm濾膜過(guò)濾），流動(dòng)相一定要脫氣。

四、每天開(kāi)始使用儀器前，注意放空排氣，確保泵頭、流動(dòng)池和其它流路系統(tǒng)中無(wú)氣泡存在。

五、避免色譜柱突然產(chǎn)生大的波動(dòng)，如泵啟動(dòng)過(guò)速、升壓過(guò)快和進(jìn)樣閥搬動(dòng)過(guò)慢造成的柱壓大的波動(dòng)。

六、采用保護(hù)柱，延長(zhǎng)柱壽命。如果污染物堆積于保護(hù)柱內(nèi)，造成柱壓升高，柱效下降，峰形變差時(shí)，卸下保護(hù)柱用強(qiáng)溶劑反沖后再用或更換新保護(hù)柱。

七、避免超負(fù)荷進(jìn)樣，對(duì)Φ4.6×250mm色譜柱，絕對(duì)進(jìn)樣量應(yīng)不超過(guò)100µg。在靈敏度允許的前提下，應(yīng)盡量降低樣品濃度，減少絕對(duì)進(jìn)樣量（進(jìn)樣體積可保持不變），這是保持色譜柱性能持久良好的重要舉措之一。

八、經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱，將柱內(nèi)強(qiáng)保留組分及時(shí)洗脫出。反相柱用異丙醇－二氯甲烷（1：1）沖洗，正相柱（硅膠柱）用純甲醇或異丙醇沖洗，時(shí)間均不少于1h。

九、做完試驗(yàn)后，及時(shí)用適當(dāng)溶劑沖洗色譜柱和進(jìn)樣閥。尤其是存放時(shí)間超過(guò)12h的色譜柱和進(jìn)樣閥，一定要用足量的水徹底洗凈其中的鹽類和緩沖液，再用甲醇或乙腈沖洗，并保存在乙腈中。正相柱保存在非極性溶劑中。

十、以硅膠為基質(zhì)的色譜柱，如C18柱和C8柱等，要控制好流動(dòng)相的pH值，一般不要低于2.5，不高于7。

十一、盡量用流動(dòng)相溶解樣品，避免出現(xiàn)拖尾峰和怪峰，避免樣品在系統(tǒng)中由于溶解度降低而析出。

十二、對(duì)于阻塞或受傷嚴(yán)重的色譜柱，必要時(shí)可卸下不銹鋼濾板，超聲洗去濾板阻塞物，對(duì)塌陷污染的柱床進(jìn)行清除、填充和修補(bǔ)。此舉措可使柱效恢復(fù)到一定程度（80%），有繼續(xù)使用的價(jià)值。

十三、檢測(cè)器輸出與積分儀要匹配，要合理設(shè)置參數(shù)，如斜率、半峰寬、閾值、AUFS值和衰減等。將適宜的進(jìn)樣量和合適的參數(shù)結(jié)合起來(lái)，使主峰峰高達(dá)到記錄儀滿量程的80%左右。

十四、HPLC分析酸堿性物質(zhì)時(shí)，由于吸附作用（次級(jí)保留）使峰拖尾，加入改良劑可大大改善峰形，提高準(zhǔn)確度。一般規(guī)則是：

1、分析酸性物質(zhì)時(shí)，可加入1%的醋酸。

2、分析堿性物質(zhì)時(shí)，可加入10～20mmol/L的三乙胺。

3、酸堿物質(zhì)混為一體時(shí)，可同時(shí)加入1%的醋酸和10～20mmol/L的三乙胺。

   

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