聚丙烯酰胺等電聚焦電泳色譜儀是利用蛋白質(zhì)具有不同等電點(diǎn)的特性，以聚丙烯酰胺為電泳支持物，在其中加入載體兩性電解質(zhì)（一種含有各種連續(xù)pI的小分子混合物）的電泳分離技術(shù)。載體兩性電解質(zhì)是一系列多氨基多羧基的混合物，pI = 3～11。在制備聚丙烯酰胺凝膠時(shí)，將其混溶其中。

載體兩性電解質(zhì)在溶液中的行為可從兩方面看。一方面，溶液的pH決定它帶電荷的性質(zhì)。如溶液pH = 7時(shí)，對(duì)pI = 9的載體兩性電解質(zhì)來(lái)說(shuō)是處于酸性環(huán)境，故帶正電荷；但對(duì)pI = 3的載體兩性電解質(zhì)來(lái)說(shuō)是處于堿性環(huán)境，故帶負(fù)電荷。所以不同pI的載體兩性電解質(zhì)在同一環(huán)境中帶有不同性質(zhì)和數(shù)量的電荷。另一方面，溶液中的載體兩性電解質(zhì)又破壞了水的解離平衡，使溶液pH有所改變。當(dāng)某一載體兩性電解質(zhì)pI較低，即釋放質(zhì)子（H⁺）能力較強(qiáng)，使溶液pH值下降，這類(lèi)兩性電解質(zhì)稱(chēng)為酸性載體兩性電解質(zhì)。反之，pI高的可使溶液pH值上升，稱(chēng)為堿性載體兩性電解質(zhì)。

電泳時(shí)，凝膠板正極的電極液是磷酸，負(fù)極的電極液是氫氧化鈉。正極是酸性環(huán)境，載體兩性電解質(zhì)都帶正電荷，但由于pI不同，其所帶正電荷數(shù)量有所差異，向負(fù)極泳動(dòng)的速度不同。同理，負(fù)極是堿性環(huán)境，載體兩性電解質(zhì)帶有數(shù)量不等的負(fù)電荷，以不同速度向正極泳動(dòng)。根據(jù)載體兩性電解質(zhì)的特性，在泳動(dòng)過(guò)程中又不斷地與溶液交換質(zhì)子，改變了溶液的pH。當(dāng)達(dá)到平衡時(shí)，即得失質(zhì)子相等，不再出現(xiàn)質(zhì)子的交換時(shí)，載體兩性電解質(zhì)到達(dá)等電點(diǎn)并各處于自己的pI區(qū)域，pI即是溶液的pH值。所以溶液呈現(xiàn)不同的pH，隨載體兩性電解質(zhì)的pI梯度而形成pH梯度。

   

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