高效毛細(xì)管電泳色譜儀電動(dòng)進(jìn)樣是當(dāng)在毛細(xì)管的進(jìn)樣端浸入樣品溶液并加上電場E時(shí),組分因電泳和電滲作用而進(jìn)入毛細(xì)管內(nèi)。由于毛細(xì)管內(nèi)徑很小,對進(jìn)樣技術(shù)要求很高,進(jìn)樣區(qū)帶寬度約是毛細(xì)管柱長的1%~2%,不能引入顯著的區(qū)帶擴(kuò)張,以確保系統(tǒng)的高效;樣品量必須<100nL,否則易造成過載。
一、進(jìn)樣方法:
毛細(xì)管洗凈后,用微量注射器注入緩沖液,然后將其兩端分別浸入兩個(gè)盛有緩沖液的儲(chǔ)瓶。電動(dòng)進(jìn)樣時(shí),將含樣品溶液的儲(chǔ)瓶代替一端的緩沖液儲(chǔ)瓶,通過樣品溶液引入進(jìn)樣電壓(為分離電壓的1/5~1/3),電路按一定時(shí)間周期接通,一般是幾秒鐘接通一次,使進(jìn)入毛細(xì)管的樣品區(qū)帶變窄。然后斷電,將緩沖液儲(chǔ)瓶代替樣品溶液瓶,再通入高壓電,使電泳開始。為使電壓沿管線分布均勻,應(yīng)使樣品溶液與緩沖液的電導(dǎo)率相近。
二、進(jìn)樣質(zhì)量:
電動(dòng)進(jìn)樣時(shí),在時(shí)間t內(nèi),進(jìn)入毛細(xì)管的樣品質(zhì)量Q為:
Q =πr2(vep + veo)Ct
= πr2(μep + μeo)ECt
= πr2(μep + μeo)VCt/L
式中:r為毛細(xì)管內(nèi)徑,V為毛細(xì)管兩端的電壓,L為毛細(xì)管總長度,C為樣品濃度。
電動(dòng)進(jìn)樣的控制參數(shù)是電場強(qiáng)度E和進(jìn)樣時(shí)間t。其中E通常為1~10kV/60cm;t通常為1~10s,有時(shí)可達(dá)60s或更大。
三、特點(diǎn):
1、優(yōu)點(diǎn):
(1)電動(dòng)進(jìn)樣對毛細(xì)管內(nèi)的填充介質(zhì)沒有限制,屬普適性進(jìn)樣方法,可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化操作。
(2)進(jìn)樣裝置簡單。
(3)適用于荷電樣品進(jìn)樣,特別適合粘度大的樣品。
(4)電動(dòng)進(jìn)樣是毛細(xì)管凝膠電泳的唯一進(jìn)樣方式。因?yàn)樵谀z狀態(tài)下,壓力進(jìn)樣和擴(kuò)散進(jìn)樣都很困難。
(5)可用于痕量富集。但樣品溶液的離子強(qiáng)度必須保持恒定,否則在該點(diǎn)的電壓會(huì)急劇變化。
2、缺點(diǎn):
電動(dòng)進(jìn)樣對離子組分存在偏向,淌度大的離子比淌度小的離子的進(jìn)樣量大,淌度大且與電滲流方向相反的離子可能進(jìn)不去,而降低分析的準(zhǔn)確性和可靠性。
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