根據(jù)高效色譜儀塔板理論,有效理論塔板數(shù)n有效是衡量柱效能的指標(biāo),表示樣品組分在高效色譜儀色譜柱內(nèi)的分配次數(shù)。但樣品中各組分,特別是難分離物質(zhì)對(即物理常數(shù)相近,結(jié)構(gòu)類似的相鄰組分)在一根色譜柱內(nèi)能否得到分離,取決于各組分在固定相中分配系數(shù)的差異,也就是取決于固定相的選擇性,而不是分配次數(shù)的多少。柱效能不能說明難分離物質(zhì)對的實際分離效果,選擇性無法說明柱效率的高低。因此,必須引入一個既能反映柱效能,又能反映柱選擇性的指標(biāo),作為色譜柱的總分離效能指標(biāo),來判斷難分離物質(zhì)對在色譜柱中的實際分離情況,這一指標(biāo)就是分離度R。
分離度R是相鄰兩組分色譜峰的保留時間之差與兩組分色譜峰峰底寬度平均值的比值。即:
R = 2(tR2-tR1)/(W1+W2)
式中:tR為組分的保留時間,W為組分的色譜峰峰底寬度。
1、R = 0.8:相鄰兩峰的分離程度達(dá)89%
2、R = 1:相鄰兩峰的分離程度達(dá)98%
3、R = 1.5:相鄰兩峰的分離程度達(dá)99.7%
4、R > 1.5:相鄰兩峰的基線分離,相鄰兩峰完全分離。
由于分離度R總括了實現(xiàn)組分分離的熱力學(xué)(即峰間距)和動力學(xué)(即峰寬)兩方面因素,定量地描述了混合物中相鄰兩組分實際分離的程度,因此,用它作為高效色譜儀色譜柱的總分離效能指標(biāo)。
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