聚丙烯酰胺凝膠電泳儀（PAGE）是以聚丙烯酰胺凝膠作為載體的電泳技術(shù)，于1959年建立，1964年進(jìn)一步從理論和實(shí)驗(yàn)技術(shù)上得到改進(jìn)并推廣應(yīng)用。由于分辨率高，目前已廣泛用于蛋白質(zhì)等生物大分子的分析。

一、PAGE工作原理：

聚丙烯酰胺凝膠具有高粘度和高摩擦阻力，電泳過(guò)程中能防止對(duì)流，把擴(kuò)散減到最小。凝膠具有多孔性，孔徑與蛋白質(zhì)分子大小大致相同，能產(chǎn)生分子篩效應(yīng)，其分離既與電荷密度有關(guān)，又與分子大小有關(guān)，對(duì)分離不同相對(duì)分子量的生物大分子極為有利。

二、PAGE載體特性：

采用聚丙烯酰胺凝膠作為載體的目是防止電泳過(guò)程中分子的對(duì)流和擴(kuò)散，使待測(cè)組分得到更有效的分離。載體應(yīng)具備以下特性：

1、物理化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，在電泳過(guò)程中不受環(huán)境因素的影響，保持原有的狀態(tài)和性能。

2、化學(xué)惰性，在電泳過(guò)程中不與緩沖液中的離子和待分離的生物大分子發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，不干擾生物大分子的電泳過(guò)程。

3、分布均勻，電滲小，結(jié)果重復(fù)性好。

三、聚丙烯酰胺凝膠合成方式：

聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺（CH₂ = CH－CO－NH₂，簡(jiǎn)稱(chēng)Acr）和交聯(lián)劑N，N′－甲叉雙丙烯酰胺（CH₂ = CH－CO－NH－CO－CH = CH₂，簡(jiǎn)稱(chēng)Bis）在催化劑作用下聚合而成的含酰胺基側(cè)鏈的脂肪族長(zhǎng)鏈，相鄰兩個(gè)鏈通過(guò)甲叉橋交鏈起來(lái)，鏈縱橫交錯(cuò)，形成不帶電荷且具有分子篩性質(zhì)的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)凝膠。參與反應(yīng)的催化劑有兩種成分，一種是引發(fā)劑，提供原始自由基，通過(guò)自由基傳遞，使單體Acr成為自由基，引發(fā)聚合反應(yīng)；另一種是加速劑，加快引發(fā)劑釋放自由基的速度。

聚丙烯酰胺凝膠的合成是通過(guò)提供氧游離基的催化，使體系發(fā)生氧化還原反應(yīng)來(lái)完成，催化體系的實(shí)質(zhì)是自由基催化的氧化還原過(guò)程。聚丙烯酰胺凝膠合成方式有化學(xué)聚合和光聚合。

1、化學(xué)聚合：

（1）原理：

引發(fā)劑過(guò)硫酸銨（AP）在加速劑N，N，N′，N′－四甲基乙二胺（TEMED）的催化下形成游離氧自由基，即S₂O₈²ˉ→ 2SO₄ˉ，硫酸自由基的氧原子激活單體Acr形成單體長(zhǎng)鏈，交聯(lián)劑Bis將單體長(zhǎng)鏈間連成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。

Acr和Bis決定孔徑大小，AP和TEMED決定聚合速度。

（2）影響化學(xué)聚合的因素：

1）引發(fā)劑和加速劑的濃度：

引發(fā)劑和加速劑的濃度小，聚合速度慢。濃度過(guò)大，易導(dǎo)致電泳時(shí)燒膠和區(qū)帶畸變。

一般使聚合過(guò)程在40～60min內(nèi)完成。

2）系統(tǒng)pH：

在堿性pH時(shí)，聚合速度快。在酸性條件時(shí)，同樣濃度的溶液，聚合速度慢。

存在一個(gè)最優(yōu)pH，以獲得最優(yōu)聚合結(jié)果。

3）溫度：

溫度高，聚合速度快。溫度低，聚合速度慢。

低溫聚合時(shí)，凝膠會(huì)變得脆而渾濁，重復(fù)性差。在25℃聚合的凝膠，較透明，有彈性。

4）分子氧：

分子氧能使AP分解，導(dǎo)致自由基淬滅，阻止多聚體鏈長(zhǎng)的增加。

進(jìn)行化學(xué)聚合時(shí)，反應(yīng)液應(yīng)與空氣隔絕。

5）系統(tǒng)純度：

有些材料如聚丙烯酸甲酯有機(jī)玻璃和一些金屬等會(huì)抑制聚合反應(yīng)，反應(yīng)液和容器表面接觸的一層不能形成凝膠。

某些化學(xué)物質(zhì)可減慢聚合速度。

（3）應(yīng)用：

PAGE的分離膠（小孔膠）是通過(guò)化學(xué)聚合法制備而成。

2、光聚合：

（1）原理：

引發(fā)劑核黃素在加速劑TEMED和光照條件下，分解成無(wú)色的還原型（無(wú)色核黃素），在少量O₂條件下，還原型核黃素被O₂再氧化形成自由基，從而引發(fā)聚合反應(yīng)。

（2）影響光聚合的因素：

1）需痕量氧原子存在，但過(guò)量的氧會(huì)阻止鏈長(zhǎng)的增加。

2）核黃素用量少（4mg/100mL），生物樣品不失活。

3）光源容易獲取，改變光照量可控制聚合時(shí)間。光照量不易掌握，使凝膠孔徑不穩(wěn)定。

（3）應(yīng)用：

光聚合的凝膠孔徑大，適于制備PAGE的濃縮膠（大孔膠）。

四、聚丙烯酰胺凝膠性能指標(biāo)：

1、性能指標(biāo)：

聚丙烯酰胺凝膠性能指標(biāo)有凝膠總濃度和交聯(lián)度等。

（1）凝膠總濃度（T）：

凝膠總濃度表示凝膠溶液中單體和交聯(lián)劑的總百分含量。

T = [（a + b）/m]×100%

式中：a為單體Acr的質(zhì)量（g），b為交聯(lián)劑Bis的質(zhì)量（g），m為溶液的體積（mL）。

凝膠總濃度主要影響凝膠篩孔大小。凝膠平均孔徑隨著凝膠總濃度的增大而減小。

實(shí)驗(yàn)表明，凝膠篩孔的平均直徑和凝膠總濃度的平方根成反比。即：

D＝kd/（T^1/2）

式中：D為凝膠篩孔的平均直徑，d為多聚體分子直徑，k為常數(shù)。

凝膠總濃度可在3%～30%之間變化。凝膠總濃度過(guò)高，凝膠硬而脆，易破碎。凝膠總濃度過(guò)低，凝膠稀軟，不易操作。

（2）交聯(lián)度（C）：

交聯(lián)度表示凝膠溶液中交聯(lián)劑占單體和交聯(lián)劑總量的百分含量。

C = [b/（a + b）]×100%

交聯(lián)度決定凝膠篩孔的最大直徑。交聯(lián)度過(guò)高，凝膠不透明，缺乏彈性。交聯(lián)度過(guò)低，呈糊狀。要獲得透明而有合適機(jī)械強(qiáng)度的凝膠，單體用量高時(shí)，交聯(lián)劑量應(yīng)減少；單體用量低時(shí)，交聯(lián)劑量應(yīng)增大。

a和b的比例很重要，決定凝膠的物理性質(zhì)。

當(dāng)a/b＜10時(shí)，凝膠脆且硬，不透明，呈乳白色。

當(dāng)a/b≈30且T = 3%時(shí)，凝膠富有彈性，完全透明。

當(dāng)a/b≥100時(shí)，即使5%的凝膠也呈糊狀。

當(dāng)a＜2%和b＜0.5%時(shí)，凝膠不能聚合。

2、良好凝膠的經(jīng)驗(yàn)公式：

在100mL溶液中，Acr（g）×Bis（g）≈1.3

最常用凝膠的組成是T＝7%～7.5%，C＝2%～3%。

標(biāo)準(zhǔn)凝膠的組成是T＝7.2%，C＝2.6%，可較好分離蛋白質(zhì)。

當(dāng)分析未知樣品時(shí)，常用標(biāo)準(zhǔn)凝膠或4%～10%的梯度凝膠試測(cè)，然后確定合適的凝膠總濃度。

3、凝膠總濃度和交聯(lián)度與凝膠孔徑的關(guān)系：

聚丙烯酰胺凝膠的有效孔徑取決于凝膠總濃度和交聯(lián)度。

凝膠總濃度和交聯(lián)度與凝膠平均孔徑的關(guān)系如下：

（1）凝膠總濃度為6.5%時(shí)：

1）交聯(lián)度為1%時(shí)，平均孔徑為2.4nm

2）交聯(lián)度為5%時(shí)，平均孔徑為1.9nm

3）交聯(lián)度為15%時(shí)，平均孔徑為2.8nm

（2）凝膠總濃度為8%時(shí)：

1）交聯(lián)度為1%時(shí)，平均孔徑為2.3nm

2）交聯(lián)度為5%時(shí)，平均孔徑為1.6nm

3）交聯(lián)度為15%時(shí)，平均孔徑為2.4nm

4）交聯(lián)度為25%時(shí)，平均孔徑為3.6nm

（3）凝膠總濃度為10%時(shí)：

1）交聯(lián)度為1%時(shí)，平均孔徑為1.9nm

2）交聯(lián)度為5%時(shí)，平均孔徑為1.4nm

3）交聯(lián)度為15%時(shí)，平均孔徑為2nm

4）交聯(lián)度為25%時(shí)，平均孔徑為3nm

（4）凝膠總濃度為12%時(shí)：

1）交聯(lián)度為1%時(shí)，平均孔徑為1.7nm

2）交聯(lián)度為5%時(shí)，平均孔徑為0.9nm

（5）凝膠總濃度為15%時(shí)：

1）交聯(lián)度為1%時(shí)，平均孔徑為1.4nm

2）交聯(lián)度為5%時(shí)，平均孔徑為0.7nm

當(dāng)凝膠總濃度＜2.5%時(shí)，可篩分相對(duì)分子量＞10⁶的大分子。

當(dāng)凝膠總濃度＞30%時(shí)，可篩分相對(duì)分子量＜2000的多肽。

當(dāng)交聯(lián)度為5%時(shí)，凝膠平均孔徑在各凝膠總濃度時(shí)均最小。

4、凝膠的分子篩效應(yīng)：

凝膠的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)具有分子篩效應(yīng)，分子篩效應(yīng)的大小取決于凝膠孔徑大小與生物大分子大小的接近程度。凝膠總濃度不同，平均孔徑不同，不同大小和形狀的大分子通過(guò)篩孔時(shí)受到的阻力不同，加上大分子的電荷效應(yīng)，使遷移率不同的大分子得以分離。

（1）蛋白質(zhì)相對(duì)分子量與凝膠總濃度的關(guān)系：

1）蛋白質(zhì)相對(duì)分子量范圍：＜1×10⁴

適用的凝膠總濃度：20%～30%

2）蛋白質(zhì)相對(duì)分子量范圍：1×10⁴～4×10⁴

適用的凝膠總濃度：15%～20%

3）蛋白質(zhì)相對(duì)分子量范圍：4×10⁴～1×10⁵

適用的凝膠總濃度：10%～15%

4）蛋白質(zhì)相對(duì)分子量范圍：1×10⁵～5×10⁵

適用的凝膠總濃度：5%～10%

5）蛋白質(zhì)相對(duì)分子量范圍：＞5×10⁵

適用的凝膠總濃度：2%～5%

（2）核酸相對(duì)分子量與凝膠總濃度的關(guān)系：

1）核酸相對(duì)分子量范圍：＜1×10⁴

適用的凝膠總濃度：15%～20%

2）核酸相對(duì)分子量范圍：1×10⁴～1×10⁵

適用的凝膠總濃度：5%～10%

3）核酸相對(duì)分子量范圍：1×10⁵～2×10⁶

適用的凝膠總濃度：2%～2.6%

用于大分子核酸研究的凝膠多為2.4%的大孔凝膠，凝膠太軟，幾乎是液體，不易操作，可加入0.5%瓊脂糖或在3%凝膠中加入20%蔗糖，以增加機(jī)械強(qiáng)度而又不影響凝膠篩孔大小。

五、PAGE特點(diǎn)：

1、優(yōu)點(diǎn)：

（1）凝膠孔徑與生物大分子大小具有相似的數(shù)量級(jí)，具有良好的分子篩效應(yīng)。

（2）根據(jù)待分離大分子的相對(duì)分子量，通過(guò)改變凝膠總濃度和交聯(lián)度可調(diào)節(jié)凝膠孔徑，使大分子得到較好分離。

（3）在一定濃度范圍內(nèi)，凝膠透明，有彈性，機(jī)械強(qiáng)度好。

（4）凝膠是由－C－C－C－C－結(jié)合的酰胺類(lèi)多聚物，側(cè)鏈上具有不活潑的酰胺基，沒(méi)有其它帶電基團(tuán)，無(wú)吸附，幾乎無(wú)電滲作用。

（5）化學(xué)性能穩(wěn)定，與被分離物不起化學(xué)反應(yīng)，在很多溶劑中不溶，凝膠雜質(zhì)少，不污染樣品，與生物大分子不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，樣品分離后仍然保持生物活性。

（6）可按需要把帶有一定電荷的基團(tuán)作為共聚體滲入其中。

（7）電泳過(guò)程中對(duì)溫度和pH變化小。

（8）抗對(duì)流性好，散熱性好，樣品不易擴(kuò)散。

（9）把分子篩效應(yīng)和電荷效應(yīng)結(jié)合在同一方法中，可達(dá)到更高的分離度。尤其在不連續(xù)凝膠電泳中，集濃縮效應(yīng)、分子篩效應(yīng)和電荷效應(yīng)為一體，分離度極高。

（10）只要Acr純度高，在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，電泳結(jié)果具有很好的重復(fù)性。

（11）柱效極高，靈敏度高，分離時(shí)間短。

（12）需要樣品量少，1～100μg足夠。

2、缺點(diǎn)：

（1）凝膠制備較困難，使用壽命短。

（2）進(jìn)樣端易堵，若有氣泡則難以除去，影響分離。

六、連續(xù)PAGE：

連續(xù)PAGE是在整個(gè)電泳體系中采用的凝膠孔徑、緩沖液離子組成和緩沖液pH都相同，電泳時(shí)僅具有分子篩效應(yīng)和電荷效應(yīng)。具有以下特點(diǎn)：

1、制膠簡(jiǎn)單快捷。

2、緩沖液pH值恒定，可防止樣品進(jìn)入凝膠后因pH值改變而發(fā)生凝聚和沉淀。

3、緩沖液離子組成簡(jiǎn)單，來(lái)源廣泛。

4、分辨率不高。

七、不連續(xù)PAGE：

不連續(xù)PAGE采用兩種以上的凝膠孔徑、緩沖液離子組成和緩沖液pH，使凝膠孔徑、緩沖液離子組成、緩沖液pH和電位梯度具有不連續(xù)性，電泳時(shí)存在樣品的濃縮效應(yīng)、凝膠的分子篩效應(yīng)和電荷效應(yīng)，使樣品分離效果好，分辨率高，適用于復(fù)雜和特殊樣品的分離。其中不連續(xù)PAGE的盤(pán)狀凝膠電泳最為常用。

1、盤(pán)狀凝膠電泳組成：

（1）凝膠層：

1）樣品膠：T = 3.1%，C = 20%

2）濃縮膠：T = 3.1%，C = 20%

3）分離膠：T = 7.2%，C = 2.6%

（2）緩沖液離子組成和pH：

1）電極緩沖液：pH = 8.3的Tris－甘氨酸緩沖液

2）樣品膠緩沖液：pH = 6.8的Tris－HCl緩沖液

3）濃縮膠緩沖液：pH = 6.8的Tris－HCl緩沖液

4）分離膠緩沖液：pH = 8.9的Tris－HCl緩沖液

（3）電位梯度：

在電場(chǎng)中自然形成不連續(xù)的電位梯度。

2、三大效應(yīng)：

在盤(pán)狀凝膠電泳的不連續(xù)體系中，存在樣品的濃縮效應(yīng)、凝膠的分子篩效應(yīng)和電荷效應(yīng)三大效應(yīng)。

（1）濃縮效應(yīng)：

1）凝膠層的不連續(xù)性：

①樣品膠：為大孔膠，采用光聚合法制備。樣品預(yù)先加在其中，起防止對(duì)流的作用，避免樣品跑到上面的緩沖液中。目前電泳一般不制作此膠。

②濃縮膠：為大孔膠，采用光聚合法制備。起防止對(duì)流的作用，樣品在其中濃縮，并按其遷移率遞減的順序逐漸在其與分離膠的界面處濃縮成薄層。

③分離膠：為小孔膠，采用化學(xué)聚合法制備。樣品在其中進(jìn)行電泳和分子篩分離，起防止對(duì)流的作用。蛋白質(zhì)分子在大孔凝膠中受到的阻力小，移動(dòng)速度快。進(jìn)入小孔凝膠時(shí)受到的阻力大，移動(dòng)速度減慢。由于凝膠層的不連續(xù)性，在濃縮膠與分離膠的界面處使樣品濃縮，區(qū)帶變窄。

2）緩沖液離子組成的不連續(xù)性：

在電場(chǎng)中如有兩種電荷符號(hào)相同的離子向同一方向移動(dòng)，其遷移率不同，兩種離子若能形成界面，則跑在前面的離子稱(chēng)為快離子（前導(dǎo)離子），跑在后面的離子稱(chēng)為慢離子（尾隨離子）。為了使樣品達(dá)到濃縮的目的，需在緩沖液中加入有效遷移率不同的兩種離子，并使這兩種離子在緩沖液中組成不連續(xù)的兩相，即在三層凝膠中加入快離子，在電極緩沖液中加入慢離子。為了保持溶液的電中性和一定的pH值，需加入一種與快、慢離子電荷符號(hào)相反的離子，稱(chēng)為緩沖配對(duì)離子，使緩沖配對(duì)離子分布于全部緩沖液中，即三層凝膠緩沖液和電極緩沖液中。

如分離蛋白質(zhì)時(shí)，通常采用氯離子（Clˉ）為快離子，甘氨酸根離子（(NH₂CH₂COOˉ）為慢離子，三羥甲基氨基甲烷（Tris⁺）為緩沖配對(duì)離子。

電泳開(kāi)始前，慢離子位于兩個(gè)電極槽中，快離子分布于三層凝膠中，樣品在樣品膠中，緩沖配對(duì)離子分布于全部緩沖液中。電泳進(jìn)行時(shí)，快離子與慢離子的界面向下移動(dòng)。由于選擇適當(dāng)?shù)膒H值緩沖液，使蛋白質(zhì)的有效遷移率介于快、慢離子之間，而濃縮成為極窄的區(qū)帶。當(dāng)樣品到達(dá)濃縮膠與分離膠的界面處時(shí)，離子界面繼續(xù)前進(jìn)，蛋白質(zhì)被留在后面，然后被分成多個(gè)區(qū)帶。

3）緩沖液pH的不連續(xù)性：

在濃縮膠與分離膠之間有pH的不連續(xù)性是為了控制慢離子的解離度，從而控制其有效遷移率，要求在樣品膠和濃縮膠中，慢離子比所有被分離樣品的有效遷移率都低，使樣品夾在快離子與慢離子的界面之間被濃縮。而在分離膠中，慢離子的有效遷移率比所有被分離樣品的有效遷移率都高，使樣品不再受離子界面的影響。

電極緩沖液pH = 8.3，甘氨酸的電離小，有效遷移率小。濃縮膠中的氯離子完全電離，有效遷移率大。蛋白質(zhì)在濃縮膠中介于快、慢離子之間。電泳開(kāi)始后，氯離子跑得最快，留下一低電導(dǎo)區(qū)，產(chǎn)生高電位梯度，使甘氨酸根離子追趕氯離子，蛋白質(zhì)夾在中間被壓縮。

4）電位梯度的不連續(xù)性：

在不連續(xù)體系中，電位梯度的差異是自然形成的。電泳開(kāi)始后，由于快離子的遷移率最大，會(huì)很快超過(guò)蛋白質(zhì)，在快離子的后邊形成一個(gè)離子濃度低的區(qū)域即低電導(dǎo)區(qū)。由于電導(dǎo)與電位梯度成反比，低電導(dǎo)區(qū)的電位梯度較高。高電位梯度使蛋白質(zhì)和慢離子在快離子后面加速移動(dòng)。當(dāng)快離子、慢離子和蛋白質(zhì)的有效遷移率與電位梯度的乘積分別相等時(shí)，則三種離子的移動(dòng)速度相同。快、慢離子的移動(dòng)速度相等的穩(wěn)定狀態(tài)建立后，在快、慢離子之間形成一個(gè)穩(wěn)定而又不斷向正極移動(dòng)的界面，即在高、低電位梯度區(qū)之間形成一個(gè)迅速移動(dòng)的界面，由于蛋白質(zhì)的有效遷移率恰好介于快、慢離子之間，因此就聚焦在這個(gè)移動(dòng)的界面附近，被濃縮成一個(gè)狹小的中間層。

（2）分子篩效應(yīng)：

離子界面到達(dá)濃縮膠與分離膠的界面處時(shí)，凝膠的pH變化明顯，緩沖液中甘氨酸的解離迅速增加，有效遷移率超過(guò)蛋白質(zhì)，隨之高電位梯度消失，蛋白質(zhì)在均一的電位梯度和pH條件下通過(guò)一定孔徑的分離膠。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)的相對(duì)分子量和構(gòu)象不同時(shí)，通過(guò)分離膠所受到的阻力不同，因遷移率不同而被分開(kāi)。凝膠這種分離不同尺寸分子的特性是由于它的尺寸篩分能力，這種現(xiàn)象稱(chēng)為分子篩效應(yīng)。

（3）電荷效應(yīng)：

蛋白質(zhì)在濃縮膠與分離膠的界面處被高度濃縮，堆積成層，形成一狹小的高濃度的蛋白質(zhì)區(qū)帶，但由于每種蛋白質(zhì)分子所載有效電荷不同，因而遷移率不同。承載有效電荷多的，移動(dòng)速度快，反之則慢。因此各蛋白質(zhì)以一定的順序排列成多個(gè)圓盤(pán)狀。

綜上所述，樣品的濃縮效應(yīng)是在濃縮膠中進(jìn)行，分子篩效應(yīng)和電荷效應(yīng)主要是在分離膠中進(jìn)行。在蛋白質(zhì)進(jìn)入分離膠時(shí)，由于在濃縮膠中的慢離子跑到蛋白質(zhì)前面，高電位梯度消失，使蛋白質(zhì)進(jìn)入均一的電位梯度和pH的分離膠中。此時(shí)，又由于分離膠的孔徑小，各蛋白質(zhì)因分子大小和形狀不同而被阻滯的程度不同，使一些即使是凈電荷相同的蛋白質(zhì)分子也因分子篩效應(yīng)不同而得到分離。

八、PAGE電泳前準(zhǔn)備工作：

1、緩沖液的選擇：

（1）緩沖液的選擇要求：

保證蛋白質(zhì)的溶解性、穩(wěn)定性和生物活性。

從理論上講，PAGE可在任何pH條件下進(jìn)行，但實(shí)際上在過(guò)酸或過(guò)堿條件下，將發(fā)生某種水解（脫酰胺）。因此，pH應(yīng)選擇在3～10之間。

（2）緩沖液的選擇原則：

如果緩沖液pH選擇在遠(yuǎn)離蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)，則蛋白質(zhì)分子所帶電荷的密度大，電泳時(shí)間短，區(qū)帶細(xì)而窄。

如果緩沖液pH選擇在靠近一種或幾種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)，則蛋白質(zhì)分子之間的電荷密度差別大，分辨率高。

緩沖液pH常選擇在8～9.5之間。

常用緩沖液有Tris－甘氨酸（pH = 8.3～9.5），Tris－硼酸（pH = 8.3～9.3）和Tris－醋酸（pH = 7.2～8.5）等。

2、離子強(qiáng)度的選擇：

離子強(qiáng)度既要起到緩沖作用，又要產(chǎn)生的焦耳熱少。一般選用較低的離子強(qiáng)度。

一般選擇緩沖液的離子強(qiáng)度為0.01～0.1mol/L。

3、凝膠總濃度的選擇：

由于PAGE分離不僅取決于蛋白質(zhì)的電荷密度，還取決于蛋白質(zhì)分子大小和形狀，因此與凝膠的分子篩效應(yīng)密切相關(guān)。

根據(jù)凝膠孔徑與被分離分子的大小和形狀，凝膠可分為：

（1）排阻性凝膠：凝膠總濃度大于1%的聚丙烯酰胺凝膠和瓊脂糖凝膠。

（2）非排阻性凝膠：凝膠總濃度為0.7%～1%的瓊脂糖凝膠。

凝膠總濃度太大，孔徑小于樣品分子尺寸，電泳時(shí)蛋白質(zhì)分子不能進(jìn)入凝膠，樣品仍留在加樣位置。

凝膠總濃度太小，孔徑太大，樣品中各蛋白質(zhì)分子均隨緩沖液推進(jìn)，不能得到很好的分離。

九、PAGE注意事項(xiàng)：

1、避免吸入、皮膚接觸Acr和Bis試劑。

2、制膠時(shí)要充分搖勻，最后加TEMED。

3、Acr和Bis要避光保存。

4、混合溶液的保存不宜超過(guò)一個(gè)月。

5、固體膠切忌倒入水池。

6、玻璃管表面應(yīng)光滑潔凈，用蔗糖溶液封住管底，否則會(huì)造成凝膠與玻璃管之間產(chǎn)生氣泡。

7、盡量不要破壞膠面，否則樣品區(qū)帶不平整。

十、PAGE應(yīng)用：

廣泛用于蛋白質(zhì)和較小分子核酸的分離。

   

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