影響離子交換鍵合相色譜儀溶質(zhì)保留值的因素有流動相的pH值、離子強(qiáng)度和有機(jī)改性劑等。
一、流動相的pH值:
1、弱酸和弱堿的保留值與洗脫液的pH值有關(guān)。
解離并參加離子交換而被分離。
不解離,不參加離子交換,以分子形式幾乎無保留地通過色譜柱。
流動相的pH值選擇應(yīng)適中,最好選擇在被分離的酸或堿的pka或pkb附近,使其解離適中,達(dá)到最佳分離。
采用不同pH值的緩沖液進(jìn)行梯度洗脫,可提高分離度。例如陰離子交換,pH值降低,酸性弱的組分先洗脫出,酸性強(qiáng)的組分后洗脫出。
2、陰離子交換劑分離有機(jī)酸的保留規(guī)律:
在用強(qiáng)陰離子交換鍵合相分離酸性藥物時,pH值增大,藥物解離度增大,k值增大,保留時間增加。
pH值越小,酸的解離被抑制,保留越小。
pH值越大,酸的解離程度越大,保留越強(qiáng)。
3、陽離子交換劑分離有機(jī)堿的保留規(guī)律:
在用強(qiáng)陽離子交換鍵合相分離堿性藥物時,pH值增大,游離堿增加,k值減小,保留時間縮短。
pH值高,堿以分子形式存在,保留值很小。
pH值低,堿以質(zhì)子化形式存在,保留值較大。
二、流動相的離子強(qiáng)度:
流動相的離子強(qiáng)度(緩沖鹽濃度)增加,k減小。原因是離子交換平衡的移動。
三、有機(jī)改性劑:
如果洗脫液中加入極性有機(jī)組分(如乙醇),則抑制離子交換,產(chǎn)生按分配機(jī)理進(jìn)行的分離。
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