把硅膠表面鍵合的極性基團(tuán)視為一層液膜,樣品組分分子在流動(dòng)相和極性液膜之間進(jìn)行分配,按分配系數(shù)的差別而實(shí)現(xiàn)分離。
把極性鍵合相視為一種弱吸附劑,樣品組分分子與固定相的極性基團(tuán)發(fā)生誘導(dǎo)作用、氫鍵作用或靜電作用而實(shí)現(xiàn)分離。吸附系數(shù)大的組分,保留時(shí)間長。
作用力主要是范德華作用力的定向作用力、誘導(dǎo)作用力或氫鍵作用力。例如用氨基鍵合相分離極性化合物時(shí),主要靠組分分子與鍵合相之間的氫鍵作用力強(qiáng)弱差別而實(shí)現(xiàn)分離,如分離糖類等。若分離含有芳環(huán)等可誘導(dǎo)極化的非極性樣品時(shí),組分分子與鍵合相之間的作用力主要是誘導(dǎo)作用力。
氨基、氰基、芳硝基、二醇基和醚基鍵合相可用作正相色譜,主要以氫鍵力與溶質(zhì)相互作用,氫鍵力大小順序?yàn)榘被厩杌痉枷趸径蓟久鸦?/DIV>
(1)氨基鍵合相:
氨基鍵合相是將氨丙硅烷基鍵合在硅膠上制成的。
氨基鍵合相兼有質(zhì)子接受體和給予體的雙重性能,具有強(qiáng)極性。
對(duì)具有較強(qiáng)氫鍵作用力的樣品,顯示強(qiáng)的分子間相互作用,k值較大。
氨基具有堿性,可在酸性水溶液中作為弱陰離子交換劑,用于分離酚、羧酸和核苷酸。
氨基用作反相固定相可與糖分子中的羥基作用,廣泛用于單糖、雙糖和多糖的分離。
氨基柱不可用于羧基化合物(如甾酮和還原糖等)的分離。
(2)氰基鍵合相:
氰基鍵合相是將氰乙硅烷基鍵合在硅膠上制成的。
氰基鍵合相為質(zhì)子接受體,具有中等極性,分離選擇與硅膠類似,但比硅膠的保留值低。
對(duì)酸性、堿性樣品可獲得對(duì)稱的色譜峰。
對(duì)含雙鍵的異構(gòu)體或雙鍵環(huán)狀化合物具有良好的分離能力。
與氨基鍵合相比較,k值小。
(3)芳硝基鍵合相:
芳硝基鍵合相具有電子轉(zhuǎn)移功能,呈弱極性,對(duì)芳香族化合物和多環(huán)芳烴有良好的分離選擇性。
(4)二醇基鍵合相:
二醇基鍵合相呈弱極性,可分離有機(jī)酸和甾體,也可用作分離蛋白質(zhì)的凝膠色譜的固定相。
(5)醚基鍵合相:
醚基鍵合相呈弱極性,可分離形成氫鍵的化合物(如酚類和硝基化合物),也可用作分離蛋白質(zhì)的凝膠色譜的固定相。
三、流動(dòng)相:
1、正相色譜流動(dòng)相:
流動(dòng)相由弱極性溶劑(烴類)和適量極性溶劑(氯仿、醇和乙腈)組成。
溶質(zhì)保留規(guī)律:
(1)溶質(zhì)的分離是基于親水結(jié)構(gòu)的差異。
(2)溶質(zhì)的極性越大,保留值越大。
(3)流動(dòng)相的極性越大,洗脫強(qiáng)度越大。
2、反相色譜流動(dòng)相:
對(duì)強(qiáng)極性化合物,極性鍵合相可用作反相色譜。如用氨基柱分離糖類或多肽化合物時(shí),用乙腈-水(乙腈60%~80%)作洗脫液。
用水溶液作流動(dòng)相的極性鍵合相色譜:親水相互作用色譜。
分離機(jī)制:分配和離子交換。
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