高效毛細(xì)管電泳儀檢測器有紫外檢測器、熒光檢測器、電化學(xué)檢測器、質(zhì)譜檢測器和拉曼光譜檢測器等。其中前兩種使用最廣。

一、紫外檢測器：

1、原理：

入射紫外光通過樣品時(shí)，被吸收的多少符合朗伯－比耳定律。

檢測點(diǎn)在靠近末端的毛細(xì)管上，檢測點(diǎn)的毛細(xì)管的外涂層要燒掉。

2、檢測方法：

（1）固定波長：

光源為低紫外氘燈，用濾光片獲得固定波長的光。

（2）可變波長：

光源為氘燈或鎢燈，用單色器（棱鏡或光柵）獲得連續(xù)可調(diào)波長的光。

（3）快速掃描：

1）利用線性二極管陣列快速捕獲紫外光，

2）利用硅光電倍增管作快速掃描。

二、熒光檢測器：

1、原理：

多原子分子吸收光子時(shí)，電子從基態(tài)躍遷到高能態(tài)，然后分子通過無輻射過程弛豫到最低激發(fā)態(tài)，并在回到基態(tài)時(shí)發(fā)射出光子（熒光）。

2、光源：

激發(fā)用的輻射光為紫外光或激光。

激光單色性好，容易校準(zhǔn)和減小光散射，可大大提高檢測靈敏度。常用波長325nm的氦－鎘激光光源（He－Cd）。

3、檢測方法：

檢測在毛細(xì)管上進(jìn)行，毛細(xì)管的外涂層要燒掉。

4、應(yīng)用：

在DNA序列測定的HPCE中廣泛使用。但對不能發(fā)射天然熒光的化合物，須預(yù)先加熒光劑。

三、電化學(xué)檢測器：

電化學(xué)檢測器可避免光學(xué)類檢測器遇到的光程太短的問題，是HPCE中最靈敏的檢測器之一。

檢測毛細(xì)管中的電泳流出物，根據(jù)檢測原理可分為伏安檢測器和電導(dǎo)檢測器等。

四、質(zhì)譜檢測器：

1、原理：

將待測物分子轉(zhuǎn)為帶電粒子，然后用恒定磁場使帶電粒子按質(zhì)量大小順序分離，形成質(zhì)量譜圖。

2、特點(diǎn)：

（1）對單一組分有很強(qiáng)的鑒別能力。

（2）對復(fù)雜大分子混合物的分離能力極強(qiáng)。

3、類型：

類型很多，其中電噴射離子質(zhì)譜對蛋白質(zhì)的鑒別特別有用。

五、拉曼光譜檢測器：

1、原理：

單色光照射被分析物，通過拉曼技術(shù)控制散射光，使其在返回原來位置時(shí)作全方位的重新發(fā)射。入射光和散射光之間的頻差一般落在中紅外區(qū)。

2、光源：

光源為40mW的He－Cd激光發(fā)生器，在422nm處發(fā)射激光，在471.2nm處檢測散射光。

六、間接檢測：

間接檢測有間接紫外檢測、間接熒光檢測和間接電導(dǎo)檢測等。

間接紫外檢測是在緩沖液中加少量在紫外區(qū)有吸收的化合物（間接試劑），使之產(chǎn)生很高的本底。當(dāng)無紫外吸收的離子通過窗口時(shí)，從而產(chǎn)生一個負(fù)峰。間接紫外檢測靈敏度比直接檢測低1～2個數(shù)量級。

   

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