高效離子交換色譜儀的操作使用包括離子交換劑的選擇與處理、色譜柱的選擇、裝柱、平衡緩沖液的選擇、上樣、洗脫、檢測、分離后樣品的濃縮與脫鹽、離子交換劑的再生與轉型等。

一、離子交換劑的選擇：

1、確定是用陽離子交換劑，還是陰離子交換劑。

2、選擇離子交換劑的基質(zhì)。

二、離子交換劑的處理：

處理流程：充分溶脹，除去雜質(zhì)和細小顆粒，用酸堿分別浸泡水洗至中性，排除氣泡。

陽離子交換樹脂一般為Na型，陰離子交換樹脂一般為Cl型。處理時，一般情況下，陽離子交換樹脂最后用NaOH處理，陰離子交換樹脂最后用HCl處理，使用的酸堿濃度一般小于2M，浸泡時間一般為30min。

三、色譜柱的選擇：

離子交換色譜柱通常粗短，直徑和長度比一般為1：10～1：50。

四、裝柱：

1、色譜柱安裝要垂直。

2、裝柱時要均勻平整，不能有氣泡。

五、平衡緩沖液的選擇：

平衡緩沖液是指裝柱后和上樣后用于平衡離子交換色譜柱的緩沖液。

平衡緩沖液的離子強度和pH值要保證各個待分離物質(zhì)的穩(wěn)定，要使各個待分離物質(zhì)與離子交換劑有適當?shù)慕Y合，并盡量使待分離物質(zhì)和雜質(zhì)與離子交換劑的結合有較大的差別。

六、上樣：

上樣方式有正上柱和反上柱。

上樣時注意樣品液的離子強度和pH值，上樣量應小于工作交換量。

七、洗脫：

1、洗脫液的選擇：

（1）保證所有組分在洗脫液梯度范圍內(nèi)都是穩(wěn)定的。

（2）要使結合在離子交換劑上的所有組分在洗脫液梯度范圍內(nèi)都能夠被洗脫。

（3）梯度范圍盡量小一些，以提高分辨率。

2、洗脫方式：

離子交換色譜一般采用梯度洗脫，通常有改變離子強度和改變pH值兩種洗脫方式。

（1）改變離子強度的洗脫：

在洗脫過程中逐步增大離子強度，從而使與離子交換劑結合的各個組分被洗脫下來。

（2）改變pH值的洗脫：

陽離子交換劑一般是pH值從低到高洗脫，陰離子交換劑一般是pH值從高到低洗脫。

由于pH值可能對蛋白的穩(wěn)定性有較大的影響，一般采用改變離子強度進行洗脫。

3、洗脫速度：

洗脫液的流速會影響離子交換分離效果，洗脫速度通常要保持恒定。

一般來說，洗脫速度慢比快的分辨率要好，但過慢會造成分離時間長、樣品擴散、譜峰變寬和分辨率降低等。

如果洗脫峰相對集中于某個區(qū)域造成重疊，應適當縮小梯度范圍或降低洗脫速度來提高分辨率。

如果分辨率較好，但洗脫峰過寬，可適當提高洗脫速度。

八、檢測：

檢測器檢測。

九、分離后樣品的濃縮與脫鹽：

經(jīng)離子交換分離后得到的樣品往往鹽濃度較高，體積較大，樣品濃度較低，所以分離后樣品一般要進行濃縮與脫鹽處理。

十、離子交換劑的再生與轉型：

1、離子交換劑的再生：指對使用過的離子交換劑進行處理，使其恢復原來性狀的過程。

2、離子交換劑的轉型：指離子交換劑由一種平衡離子轉為另一種平衡離子的過程。

   

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