目錄

 

第一節(jié) 概述

第二節(jié) 紫外可見吸收檢測(cè)器

第三節(jié) 光電二極管陣列檢測(cè)器

第四節(jié) 示差折光檢測(cè)器

第五節(jié) 蒸發(fā)光散射檢測(cè)器

第六節(jié) 電導(dǎo)檢測(cè)器

第七節(jié) 安培檢測(cè)器

第八節(jié) 熒光檢測(cè)器

第九節(jié) 化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器

 

第一節(jié) 概述

 

理想的高效液相色譜儀檢測(cè)器應(yīng)能瞬間真實(shí)地反映色譜柱流出的流動(dòng)相中組分的存在及其量的快速變化。

一、希望在無(wú)組分流出即僅有流動(dòng)相通過(guò)檢測(cè)器時(shí)，其響應(yīng)信號(hào)曲線（基線）是穩(wěn)定而無(wú)波動(dòng)的，于是有噪聲和漂移的要求。

二、希望痕量組分進(jìn)入檢測(cè)器就有響應(yīng)，于是有靈敏度和檢測(cè)下限的要求。

三、希望在某些情況下對(duì)所有進(jìn)入檢測(cè)器的組分均有響應(yīng)，而在另一些情況下僅對(duì)某種化合物有響應(yīng)，于是有通用性和選擇性的要求。

四、希望保持毛細(xì)管柱的分離效能，于是有柱后譜帶不展寬的要求。

五、希望十分窄的譜帶快速通過(guò)檢測(cè)器時(shí)峰形不失真，于是有檢測(cè)器響應(yīng)時(shí)間的要求。

六、希望定量準(zhǔn)確、可靠，于是有相對(duì)響應(yīng)因子、線性和線性范圍的要求等。

 

第二節(jié) 紫外可見吸收檢測(cè)器

 

紫外可見吸收檢測(cè)器（UVD）是基于朗伯－比耳定律，根據(jù)被測(cè)組分對(duì)紫外光或可見光具有吸收，吸收強(qiáng)度與組分濃度成正比的關(guān)系進(jìn)行檢測(cè)。UVD是高效液相色譜儀分析中應(yīng)用最廣泛的檢測(cè)器，對(duì)占物質(zhì)總數(shù)約80%的有紫外吸收的物質(zhì)均有影響，既可檢測(cè)190～350nm（紫外光區(qū)）的光吸收變化，也可向可見光范圍350～700nm延伸。高效液相色譜中約75%的檢測(cè)器是UVD，其中50%是多波長(zhǎng)紫外可見吸收檢測(cè)器，25%是光電二極管陣列檢測(cè)器（PDAD）。

一、結(jié)構(gòu)：

UVD由光源、分光系統(tǒng)、樣品池和檢測(cè)系統(tǒng)等組成。

二、工作原理：

高效液相色譜流通池內(nèi)樣品的濃度與吸光度的關(guān)系遵循Lambert－Beer定律：

A = ㏒（I₀/I）=εbc

式中：A為吸光度，I₀為入射光強(qiáng)度，I為透射光強(qiáng)度，ε為樣品的摩爾吸光度，b為流通池的光程長(zhǎng)度，c為樣品濃度。

UVD常用氘燈作光源，裝有一個(gè)光柵型單色器，有兩個(gè)流通池，一個(gè)是參考池，另一個(gè)是測(cè)量池。氘燈發(fā)射出紫外－可見區(qū)范圍的連續(xù)波長(zhǎng)的光，波長(zhǎng)選擇范圍為190～700nm。光線照射到全息凹面光柵上，衍射的單色光照射到半透射反光鏡上被分成兩束，一束經(jīng)測(cè)量池后照射到測(cè)量光電池上，另一束經(jīng)參考池后照射到參考光電池上。若兩個(gè)流通池都通過(guò)純的均勻溶劑，則它們?cè)谧贤夤庀聨缀鯚o(wú)吸收，兩個(gè)光電池上接收到的輻射強(qiáng)度相等，即無(wú)信號(hào)輸出。當(dāng)組分進(jìn)入測(cè)量池時(shí)，吸收一定的紫外光，使兩個(gè)光電池接收到的輻射強(qiáng)度不等，即有信號(hào)輸出，輸出信號(hào)大小與組分濃度成正比。

三、檢測(cè)方式：

UVD檢測(cè)方式有直接紫外檢測(cè)、間接紫外檢測(cè)和柱后衍生化光度檢測(cè)等。

1、直接紫外檢測(cè)：

使用的流動(dòng)相為在檢測(cè)波長(zhǎng)下無(wú)紫外吸收的溶劑，檢測(cè)器直接測(cè)定被測(cè)組分的紫外吸收強(qiáng)度。

多數(shù)情況下采用直接紫外檢測(cè)。

2、間接紫外檢測(cè)：

使用具有紫外吸收的溶液作為流動(dòng)相，間接檢測(cè)無(wú)紫外吸收的組分。

在離子色譜中使用較多，如以具有紫外吸收的鄰苯二甲酸氫鉀溶液作為陰離子分離的流動(dòng)相，當(dāng)無(wú)紫外吸收的無(wú)機(jī)陰離子被洗脫到流動(dòng)相中時(shí)，會(huì)使流動(dòng)相的紫外吸收減小。

3、柱后衍生化光度檢測(cè)：

對(duì)于可與顯色劑反應(yīng)生成有色配合物的組分（過(guò)渡金屬離子和氨基酸等），可在被測(cè)組分從色譜柱中洗脫出來(lái)后與合適的顯色劑反應(yīng)，在可見光區(qū)檢測(cè)生成的有色配合物。

使用UVD檢測(cè)時(shí)，為了得到高的靈敏度，常選擇被測(cè)組分能產(chǎn)生最大吸收的波長(zhǎng)作為檢測(cè)波長(zhǎng)，但為了選擇性或其它目的也可適當(dāng)降低靈敏度而選擇吸收稍弱的波長(zhǎng)。另外，應(yīng)盡可能選擇在檢測(cè)波長(zhǎng)下沒(méi)有背景吸收的流動(dòng)相。

四、類型：

1、按波長(zhǎng)固定與可變可分：

（1）固定波長(zhǎng)紫外可見吸收檢測(cè)器：

由低壓汞燈提供固定波長(zhǎng)254nm或280nm的紫外光經(jīng)入射石英棱鏡準(zhǔn)直，再經(jīng)遮光板分為一對(duì)平行光束分別進(jìn)入流通池的測(cè)量臂和參考臂。經(jīng)流通池吸收后的出射光，經(jīng)過(guò)遮光板、出射石英棱鏡和紫外濾光片，只讓254nm的紫外光被雙光電池接收，光強(qiáng)度經(jīng)對(duì)數(shù)放大器轉(zhuǎn)化成吸光度后將信號(hào)輸出。

這類檢測(cè)器的波長(zhǎng)不能調(diào)節(jié)，不能選擇在被測(cè)組分的最優(yōu)吸收波長(zhǎng)下檢測(cè)，除有些制備型HPLC配置外，已基本淘汰。

（2）可變波長(zhǎng)紫外可見吸收檢測(cè)器：

光源波長(zhǎng)選擇可任意可調(diào)，應(yīng)用非常廣泛。

1）可選擇被測(cè)組分的最大吸收波長(zhǎng)作為檢測(cè)波長(zhǎng)，提高檢測(cè)靈敏度。

2）可選擇被測(cè)組分有強(qiáng)吸收而干擾無(wú)吸收的波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)，提高分析選擇性。

3）梯度洗脫時(shí)，可選擇流動(dòng)相改變而其吸光度不變的波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)，有利于梯度洗脫。

4）可選擇的波長(zhǎng)范圍很大，既提高檢測(cè)器的選擇性，又可選用被測(cè)組分的最靈敏吸收波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)，提高檢測(cè)靈敏度。

5）具有有停流掃描功能，可繪出被測(cè)組分的光吸收譜圖，以進(jìn)行吸收波長(zhǎng)的選擇。

可變波長(zhǎng)型檢測(cè)器是當(dāng)前高效液相色譜配置最多的檢測(cè)器，其光學(xué)結(jié)構(gòu)與一般的紫外分光度計(jì)一致，主要區(qū)別是用流動(dòng)池替代了比色池。由于光源是通過(guò)單色器分光后再照射到樣品上，照射光強(qiáng)度相應(yīng)減弱。因此，這類檢測(cè)器對(duì)檢測(cè)元件（光電轉(zhuǎn)換元件）和放大器要求較高。

2、按單波長(zhǎng)與多波長(zhǎng)可分：

（1）單波長(zhǎng)式固定波長(zhǎng)紫外可見吸收檢測(cè)器。

（2）多波長(zhǎng)式固定波長(zhǎng)紫外可見吸收檢測(cè)器。

3、按對(duì)可見光的檢測(cè)與否可分：

（1）可變波長(zhǎng)紫外可見吸收檢測(cè)器。

（2）可變波長(zhǎng)紫外吸收檢測(cè)器。

4、按波長(zhǎng)掃描不同可分：

（1）不自動(dòng)掃描紫外可見吸收檢測(cè)器。

（2）自動(dòng)掃描紫外可見吸收檢測(cè)器。

（3）多波長(zhǎng)快速掃描紫外可見吸收檢測(cè)器。

光電二極管陣列檢測(cè)器屬于多波長(zhǎng)快速掃描紫外可見吸收檢測(cè)器，是高效液相色譜最有發(fā)展前景和最好的檢測(cè)器。

五、特點(diǎn)：

1、優(yōu)點(diǎn)：

（1）應(yīng)用廣泛。

（2）波長(zhǎng)可選。

（3）靈敏度高。

（4）噪聲低。

（5）線性范圍寬。

（6）對(duì)流動(dòng)相的溫度和流量變化不敏感。

（7）適用于梯度洗脫，可用于制備。

（8）必須使用無(wú)紫外吸收的溶劑作流動(dòng)相。

（9）為選擇型檢測(cè)器。

（10）為濃度型檢測(cè)器。

（11）能與多種檢測(cè)器串聯(lián)使用。

（12）為非破壞性檢測(cè)器，可與制備色譜或其它設(shè)備串聯(lián)。

（13）結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，維護(hù)方便。

2、缺點(diǎn)：

（1）對(duì)紫外吸收差的化合物（如不含不飽和鍵的烴類等）靈敏度很低。

（2）紫外吸收大的溶劑不能做流動(dòng)相。

每種溶劑都有截止波長(zhǎng)，當(dāng)小于該截止波長(zhǎng)的紫外光通過(guò)溶劑時(shí)，溶劑的透光率降至10%以下。因此，流動(dòng)相的截止波長(zhǎng)不能大于UVD的工作波長(zhǎng)。用截止波長(zhǎng)以上至少5～10nm作為工作波長(zhǎng)。

高效液相色譜常用溶劑的紫外截止波長(zhǎng)：

1）二硫化碳：380nm

2）氯仿：245nm

3）四氫呋喃：212nm

4）苯：210nm

5）乙腈：190nm

6）甲醇：205nm

7）水：187nm

（3）緩沖鹽、離子對(duì)試劑和胺改性劑也會(huì)有影響。

六、應(yīng)用：

對(duì)大部分有機(jī)物有響應(yīng)。

 

第三節(jié) 光電二極管陣列檢測(cè)器

 

光電二極管陣列檢測(cè)器（PDAD）是20世紀(jì)80年代出現(xiàn)的一種光學(xué)多通道檢測(cè)器，屬于多波長(zhǎng)快速掃描紫外可見吸收檢測(cè)器，在高效液相色譜儀分析中得到大量使用，是高效液相色譜最有發(fā)展前景和最好的檢測(cè)器。

一、工作原理：

在晶體硅上緊密排列一組（數(shù)量為200～1024個(gè)）光電二極管，光敏范圍是200～600nm。每個(gè)二極管相當(dāng)于一個(gè)單色器的出口狹縫，分辨率是1～2nm，二極管越多分辨率越高，一般是一個(gè)二極管對(duì)應(yīng)接受光譜上一個(gè)納米譜帶寬的單色光。光電二極管排列（數(shù)字分辨）和狹縫寬度（光學(xué)分析）決定檢測(cè)器的波長(zhǎng)分析能力。

復(fù)色光通過(guò)樣品池被組分選擇性吸收后進(jìn)入單色器，照射在二極管陣列上，使每個(gè)納米波長(zhǎng)的光強(qiáng)度轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的電信號(hào)強(qiáng)度，得到的是時(shí)間、波長(zhǎng)和吸光強(qiáng)度的三維譜圖，色譜圖用于定量，光譜圖用于定性，有助于復(fù)雜組分和未知組分的結(jié)構(gòu)確定。

PDAD與UVD的不同之處：

UVD是先用單色器分光，只讓特定波長(zhǎng)的光通過(guò)樣品池。

PDAD是先讓所有波長(zhǎng)的光都通過(guò)樣品池，然后通過(guò)一系列分光技術(shù)，使所有波長(zhǎng)的光在接受器上被檢測(cè)。

二、性能特點(diǎn)：

1、可實(shí)施全波長(zhǎng)掃描，快速確定最優(yōu)吸收波長(zhǎng)。

2、可同時(shí)得到多個(gè)波長(zhǎng)的色譜圖，計(jì)算不同波長(zhǎng)處的相對(duì)吸收比。

3、可在色譜分離同時(shí)，對(duì)色譜峰的指定位置實(shí)時(shí)記錄吸收光譜圖，并得到最大吸收波長(zhǎng)。

4、在色譜運(yùn)行期間，可逐點(diǎn)進(jìn)行光譜掃描，得到時(shí)間、波長(zhǎng)和光強(qiáng)度的三維譜圖。

5、選擇性好。可選擇寬波帶進(jìn)行檢測(cè)，能一次把所有組分檢測(cè)出來(lái)。

6、靈敏度比UVD高。

7、噪音低，線性范圍寬。

8、對(duì)流量和溫度的波動(dòng)不靈敏。

9、適用于梯度洗脫和制備色譜。

10、光學(xué)通量低（帶寬通量較窄）。

11、比UVD更復(fù)雜，容易漂移。

12、燈輸出能量隨時(shí)間降低。

13、色譜峰純度判斷：

（1）等高線圖法。

（2）光譜色譜三維圖法。

（3）重疊光譜圖法。

（4）波長(zhǎng)比圖法。

（5）色譜峰純度計(jì)算法。

14、色譜峰鑒定：

（1）與標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)準(zhǔn)光譜比較。

（2）與正常紫外光譜比較。

15、可提供各種類型的色譜圖：

（1）單波長(zhǎng)色譜圖。

（2）任意兩個(gè)波長(zhǎng)的吸收比色譜圖。

（3）波長(zhǎng)時(shí)間程序色譜圖。

（4）最大吸收波長(zhǎng)色譜圖，是靈敏度最高的檢測(cè)方法。

（5）總體吸收色譜圖，是定量重復(fù)性最好的檢測(cè)方法。

16、建立光譜庫(kù)，檢索被測(cè)樣品的光譜。

 

第四節(jié) 示差折光檢測(cè)器

 

示差折光檢測(cè)器（RID）為通用型檢測(cè)器，是除UVD外應(yīng)用最多的高效液相色譜儀檢測(cè)器。

一、類型：

1、反射型：根據(jù)Fresnel定律。

2、折射型：根據(jù)Snell定律。

3、干涉型。

二、工作原理：

RID是基于樣品流路與參比流路在折光指數(shù)上的差別進(jìn)行檢測(cè)的。當(dāng)折光指數(shù)差別最大時(shí)，靈敏度最大。并不檢測(cè)絕對(duì)的折光指數(shù)，而是檢測(cè)折光指數(shù)的差別。

用兩束相同角度的光照射溶劑相、樣品與溶劑相，二者對(duì)光的折射率不同，其中一束光（通常是通過(guò)樣品與溶劑相）因?yàn)榘l(fā)生偏轉(zhuǎn)而造成兩束光的強(qiáng)度差發(fā)生變化，這種變化與樣品的濃度成正比，將此差示信號(hào)放大并記錄，得到色譜圖。

溶液的折射率是溶劑（流動(dòng)相）和溶質(zhì)（樣品）各自的折射率乘以各自的摩爾濃度之和。

三、特點(diǎn)：

1、優(yōu)點(diǎn)：

（1）通用性強(qiáng)。任何一對(duì)液體都會(huì)有約0.07的折光率差異，除非被分析樣品與溶液的折光指數(shù)完全相同，都會(huì)被檢測(cè)到。

（2）檢測(cè)下限可達(dá)10ˉ⁷～10ˉ⁶g/mL。

（3）操作簡(jiǎn)便，比較耐用，維護(hù)成本低。

2、缺點(diǎn)：

（1）靈敏度低。

（2）選擇性差。

（3）受環(huán)境溫度、流量和流動(dòng)相組成等波動(dòng)的影響大，不能用于梯度洗脫。

（4）色譜峰可能是正的，也可能是負(fù)的。

四、使用注意事項(xiàng)：

1、洗脫液組成一定要恒定，不能使用梯度洗脫。

2、不能使檢測(cè)池帶壓工作，與其它檢測(cè)器串聯(lián)使用時(shí)應(yīng)放在最后。

3、流速要恒定，泵的流量波動(dòng)要小于0.5%，使用往復(fù)泵時(shí)要用阻尼裝置。

4、溫度要恒定，恒溫精度要達(dá)±10ˉ⁴℃。使用時(shí)預(yù)熱時(shí)間要充足，否則基線漂移十分嚴(yán)重。

五、應(yīng)用：

1、適用于無(wú)紫外吸收的有機(jī)物分析，如高分子化合物、糖類和脂肪烷烴等。

2、凝膠色譜中必備的檢測(cè)器。

3、制備色譜中經(jīng)常使用。

 

第五節(jié) 蒸發(fā)光散射檢測(cè)器

 

蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）是基于溶質(zhì)的光散射性質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，是20世紀(jì)80年代出現(xiàn)的高效液相色譜儀檢測(cè)器。

一、結(jié)構(gòu)：

ELSD由霧化器、加熱漂移管（溶劑蒸發(fā)室）、激光光源和光檢測(cè)器（光電轉(zhuǎn)換器）等組成。

二、工作原理：

高效液相色譜柱流出液導(dǎo)入霧化器后，被載氣（壓縮空氣或N₂）霧化成微細(xì)液滴，液滴通過(guò)加熱漂移管時(shí)，流動(dòng)相中的溶劑被蒸發(fā)掉，只留下溶質(zhì)，激光束照在溶質(zhì)顆粒上產(chǎn)生光散射，光收集器收集散射光并通過(guò)光電倍增管轉(zhuǎn)變成電信號(hào)，散射光強(qiáng)度的對(duì)數(shù)值與組分濃度的對(duì)數(shù)值呈線性關(guān)系。

三、特點(diǎn)：

1、優(yōu)點(diǎn)：

（1）最大優(yōu)點(diǎn)是能檢測(cè)不含發(fā)色團(tuán)的化合物。

（2）屬于通用性質(zhì)量型檢測(cè)器。因?yàn)镋LSD是檢測(cè)光散射變化，散射光強(qiáng)只與溶質(zhì)顆粒大小和數(shù)量有關(guān)，與溶質(zhì)本身的物理和化學(xué)性質(zhì)無(wú)關(guān)，對(duì)各種物質(zhì)的響應(yīng)幾乎相同。

（3）可檢測(cè)揮發(fā)性低于流動(dòng)相的任何樣品。

（4）流動(dòng)相低溫霧化和蒸發(fā)，對(duì)熱不穩(wěn)定和揮發(fā)性化合物也有較高的靈敏度。

（5）廣泛的梯度和溶劑兼容性，無(wú)溶劑峰干擾。

（6）輔助載氣提高了檢測(cè)靈敏度，保持檢測(cè)池內(nèi)清潔，避免污染。

（7）高精度霧化和蒸發(fā)溫度控制，保證高精度檢測(cè)。

（8）可與任何高效液相色譜連接。

2、缺點(diǎn)：

（1）靈敏度相對(duì)較低。

（2）不能使用不揮發(fā)性的流動(dòng)相，如磷酸鹽。

（3）要用霧化氣源，典型的是N₂。

（4）不同色譜條件下的霧化和除溶劑參數(shù)需要重新優(yōu)化。

（5）蒸發(fā)出的溶劑要引到戶外或通風(fēng)櫥中。

（6）對(duì)揮發(fā)性化合物的檢測(cè)不理想。

（7）一般得到的是非線性校正曲線。溶質(zhì)濃度與峰面積不呈線性關(guān)系，分別取自然對(duì)數(shù)后呈線性關(guān)系。

（8）某些化合物的檢測(cè)靈敏度不如其它檢測(cè)器。

四、相關(guān)事宜：

1、洗脫液需要霧化，霧化氣流的純度和壓力影響檢測(cè)器的信噪比。

2、流動(dòng)相要蒸發(fā)掉，不能使用不易揮發(fā)的物質(zhì)調(diào)節(jié)流動(dòng)相pH值，可通過(guò)調(diào)節(jié)蒸發(fā)溫度使比被測(cè)物質(zhì)沸點(diǎn)低的組分蒸發(fā)。在不使被測(cè)物質(zhì)蒸發(fā)的前提下，溫度越高，流動(dòng)相蒸發(fā)越完全，基線越好，信噪比越高。如果被測(cè)物質(zhì)沸點(diǎn)接近或低于流動(dòng)相的蒸發(fā)溫度，則無(wú)法檢測(cè)（以100%的水作流動(dòng)相，沸點(diǎn)比水低的有機(jī)物質(zhì)完全可以用氣相色譜進(jìn)行分離檢測(cè)）。由于流動(dòng)相和溶劑蒸發(fā)了，使用ELSD得到的色譜圖一般沒(méi)有溶劑峰，梯度洗脫沒(méi)有折光視差效應(yīng)，一般不會(huì)出現(xiàn)基線漂移。

五、應(yīng)用：

適用于無(wú)紫外吸收、無(wú)電活性、不發(fā)熒光和揮發(fā)性低于流動(dòng)相的樣品的檢測(cè)，主要用于糖類、高級(jí)脂肪酸、磷脂、維生素、氨基酸、甘油三酯、皂苷和甾體等無(wú)紫外吸收或紫外末端吸收的化合物的檢測(cè)。

 

第六節(jié) 電導(dǎo)檢測(cè)器

 

電導(dǎo)檢測(cè)器（CD）是基于離子化合物溶液具有導(dǎo)電性，通過(guò)測(cè)定流經(jīng)檢測(cè)器的離子化合物溶液電導(dǎo)率的大小來(lái)測(cè)量離子濃度。電導(dǎo)檢測(cè)器在離子色譜儀分析中應(yīng)用最多。

一、結(jié)構(gòu)：

電導(dǎo)檢測(cè)器由電導(dǎo)池、電子線路、變換靈敏度裝置和數(shù)字顯示裝置等組成，電導(dǎo)池是核心部分。電導(dǎo)池的基本結(jié)構(gòu)是在色譜柱流出液中放置兩個(gè)電極，通過(guò)電子線路測(cè)量溶液的電導(dǎo)值，檢測(cè)體積可達(dá)到微升級(jí)甚至納升級(jí)。

二、工作原理：

當(dāng)向電導(dǎo)池的兩個(gè)電極施加電壓時(shí)，溶液中的陰離子向陽(yáng)極移動(dòng)，陽(yáng)離子向陰極移動(dòng)。電解質(zhì)溶液中的離子數(shù)目和離子的移動(dòng)速度決定溶液的電阻大小，離子的移動(dòng)速度取決于離子的電荷及其大小、介質(zhì)類型、溶液溫度和離子濃度。所施加的電壓可以是直流電壓，也可以是正弦波或方波電壓。當(dāng)施加的電壓確定后，測(cè)量出電路中的電流值即可測(cè)出電導(dǎo)值。

三、檢測(cè)模式：

1、直接電導(dǎo)檢測(cè)（單柱法）：

直接以淋洗液的電導(dǎo)值為背景進(jìn)行電導(dǎo)檢測(cè)，不對(duì)淋洗液背景進(jìn)行任何抑制處理的檢測(cè)模式。

2、抑制電導(dǎo)檢測(cè)（雙柱法）：

抑制電導(dǎo)檢測(cè)是通過(guò)一定的化學(xué)或物理手段對(duì)淋洗液的背景電導(dǎo)值進(jìn)行抑制的電導(dǎo)檢測(cè)模式。

離子色譜的流動(dòng)相是電解質(zhì)溶液，樣品是以電解質(zhì)溶液為背景，樣品的濃度大大小于流動(dòng)相的濃度，這樣電導(dǎo)檢測(cè)器難以檢測(cè)由于樣品離子的存在而產(chǎn)生的微小的電導(dǎo)變化。利用抑制器可除去流動(dòng)相中的高濃度電解質(zhì)，把背景電導(dǎo)加以抑制，從而解決離子色譜使用電導(dǎo)檢測(cè)器時(shí)存在的問(wèn)題。

抑制器主要是降低流動(dòng)相的背景電導(dǎo)和增加樣品離子的電導(dǎo)，改善信噪比。通過(guò)抑制器后，流動(dòng)相被中和成電導(dǎo)值很小的水，被測(cè)樣品轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的酸或堿，大大提高了被測(cè)樣品的靈敏度。自動(dòng)再生連續(xù)工作抑制器是目前最優(yōu)的抑制器，減弱了抑制器填充樹脂再生時(shí)帶來(lái)的干擾。

常用的抑制模式：

（1）化學(xué)抑制：

通過(guò)化學(xué)中和等作用實(shí)現(xiàn)背景電導(dǎo)抑制。

（2）電化學(xué)抑制：

混合電遷移、電解水或電致水解離等作用實(shí)現(xiàn)背景電導(dǎo)抑制。

（3）輔助抑制：

通過(guò)一定的輔助方式實(shí)現(xiàn)背景電導(dǎo)抑制。

四、特點(diǎn)：

1、靈敏度高，檢測(cè)下限一般為納克級(jí)，有時(shí)可達(dá)皮克級(jí)。

2、選擇性好，可檢測(cè)具有電解活性物質(zhì)，也可檢測(cè)大量非電活性物質(zhì)中極痕量的電活性物質(zhì)。

3、線性范圍寬，一般為4～5個(gè)數(shù)量級(jí)。

4、設(shè)備簡(jiǎn)單，成本較低。

5、易于自動(dòng)操作。

6、檢測(cè)時(shí)要恒溫，不宜用于梯度洗脫。

 

第七節(jié) 安培檢測(cè)器

 

安培檢測(cè)器是一種用于檢測(cè)電活性分子在工作電極表面發(fā)生氧化或還原反應(yīng)時(shí)所產(chǎn)生電流變化的高效液相色譜儀檢測(cè)器，常用于分析離解度低，用電導(dǎo)檢測(cè)器難于檢測(cè)或根本無(wú)法檢測(cè)的離子。

一、工作原理：

當(dāng)被分離的電活性物質(zhì)流經(jīng)安培檢測(cè)器的電極表面時(shí)，由于溶液與電極間有電勢(shì)差，電活性物質(zhì)得到或失去電子，被還原或氧化，溶液和電極間發(fā)生電荷轉(zhuǎn)移而形成電流，該電流符合法拉第定律，即電流大小與待測(cè)物質(zhì)濃度成正比。

二、特點(diǎn)：

1、優(yōu)點(diǎn)：

（1）靈敏度高：

盡管僅有1%～10%被檢測(cè)的電活性物質(zhì)得到轉(zhuǎn)化，但檢測(cè)下限可達(dá)10ˉ¹²～10ˉ⁹，且對(duì)各類電活性物質(zhì)靈敏度差別很小。

（2）選擇性高：

一般只對(duì)電活性物質(zhì)有響應(yīng)，不受非電活性物質(zhì)的干擾，適用于電活性物質(zhì)的痕量檢測(cè)。而且由于每種物質(zhì)的氧化還原反應(yīng)電位不同，對(duì)于具有不同電極電位的物質(zhì)，只要在電解池的兩極間施加不同的電壓，可控制電極反應(yīng)，提高選擇性。

（3）噪聲低，線性范圍寬，響應(yīng)速度快。

（4）檢測(cè)池體積小，柱外效應(yīng)較小。

（5）結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單。

2、不足：

（1）流動(dòng)相必須具有導(dǎo)電性。

流動(dòng)相中必須有濃度為0.01～0.1mol/L的電解質(zhì)（如含鹽的緩沖液等）存在。流動(dòng)相的介電常數(shù)要足夠高，使電解質(zhì)充分解離。

（2）流動(dòng)相必須呈電化學(xué)惰性，工作電壓下背景電流小。

（3）對(duì)流動(dòng)相的流量、溫度和pH值等因素的變化比較敏感。

（4）測(cè)量還原電流時(shí)，流動(dòng)相中痕量的氧可能發(fā)生電解反應(yīng)，引起干擾。

（5）由于電極表面可能會(huì)發(fā)生吸附和催化氧化還原等現(xiàn)象，電極都有一定的壽命。目前還沒(méi)有一種通用和可靠的方法能使電極表面完全再生，需要經(jīng)常清洗和更換。

三、應(yīng)用：

適用于具有氧化還原活性（能發(fā)生電極反應(yīng)）物質(zhì)的檢測(cè)。

 

第八節(jié) 熒光檢測(cè)器

 

高效液相色譜儀熒光檢測(cè)器（FLD）是基于具有熒光的物質(zhì)在一定條件下發(fā)射熒光的強(qiáng)度與物質(zhì)的濃度成正比進(jìn)行檢測(cè)。

一、結(jié)構(gòu)：

FLD由光源、選擇激發(fā)波長(zhǎng)用的單色器、樣品流通池、選擇發(fā)射波長(zhǎng)的單色器和光電檢測(cè)器等組成。

二、工作機(jī)理：

當(dāng)某些溶液受紫外光照射后，能吸收紫外光而處于不穩(wěn)定的激發(fā)狀態(tài)，緊接著輻射出比紫外光波長(zhǎng)更長(zhǎng)的光線即熒光。在被測(cè)溶質(zhì)濃度較低時(shí)，溶質(zhì)受激發(fā)而發(fā)生的熒光強(qiáng)度與被測(cè)溶質(zhì)的濃度成正比。

由FLD光源發(fā)出的光經(jīng)激發(fā)光單色器后，得到所需要的激發(fā)光波長(zhǎng)，激發(fā)光通過(guò)樣品流通池，一部分光線被熒光物質(zhì)吸收，熒光物質(zhì)激發(fā)后，向四面八方發(fā)射熒光。為了消除入射光與散射光的影響，一般取與激發(fā)光成直角的方向測(cè)量熒光（直角光路）。熒光至發(fā)射光單色器分光后，單一波長(zhǎng)的發(fā)射光由光電檢測(cè)器接收。

三、特點(diǎn)：

1、優(yōu)點(diǎn)：

（1）靈敏度極高，是最靈敏的檢測(cè)器之一。檢測(cè)下限為10ˉ¹²～10ˉ¹⁴g/mL，比UVD高100倍，可用于痕量分析。

（2）選擇性好，產(chǎn)生熒光的必要條件：

1）物質(zhì)分子中具有能吸收激發(fā)光能量的吸收帶，即物質(zhì)分子必須具有一定的吸收結(jié)構(gòu)。

2）物質(zhì)分子吸收激發(fā)光能量后熒光效率高。

（3）對(duì)溫度和流量不敏感。當(dāng)所選用的流動(dòng)相溶劑不發(fā)射熒光時(shí)，可用于梯度洗脫。

（4）所需樣品量很小，特別適合藥物和生物化學(xué)樣品等檢測(cè)。

（5）受外界條件的影響小。

2、缺點(diǎn)：

（1）定量分析時(shí)線性范圍較窄，不宜作為一般的檢測(cè)器使用。

（2）測(cè)定中不能使用可熄滅、抑制和吸收熒光的溶劑作流動(dòng)相。

（3）對(duì)不能直接產(chǎn)生熒光的物質(zhì)，要使用色譜柱后衍生技術(shù)，操作比較復(fù)雜。

四、應(yīng)用：

1、適用于具有熒光的有機(jī)化合物的檢測(cè)。共軛和芳香族化合物最容易有熒光現(xiàn)象。氨基酸、胺類、維生素、甾族化合物和某些代謝藥物可用FLD檢測(cè)。

2、有的有機(jī)物雖然本身不產(chǎn)生熒光，但可與發(fā)熒光物質(zhì)反應(yīng)衍生化后檢測(cè)。

 

第九節(jié) 化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器

 

化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種快速、靈敏的新型高效液相色譜儀檢測(cè)器。

一、工作原理：

某些物質(zhì)在常溫下進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，生成處于激發(fā)態(tài)反應(yīng)中間體或反應(yīng)產(chǎn)物，當(dāng)它們從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時(shí)發(fā)射出光子。由于物質(zhì)激發(fā)態(tài)的能量是來(lái)自化學(xué)反應(yīng)，故稱為化學(xué)發(fā)光。當(dāng)被測(cè)組分從高效液相色譜柱中洗脫出來(lái)后，立即與適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)發(fā)光試劑混合，引起化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致發(fā)光物質(zhì)產(chǎn)生輻射，其光強(qiáng)度與該物質(zhì)的濃度成正比。

化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器不需要光源，也不需要復(fù)雜的光學(xué)系統(tǒng)，只要有恒流泵將化學(xué)發(fā)光試劑以一定的流速泵入混合器中，使之與色譜柱流出物迅速、均勻地混合，產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，通過(guò)光電倍增管將光信號(hào)變成電信號(hào)，進(jìn)行檢測(cè)。

二、特點(diǎn)：

1、檢測(cè)下限可達(dá)10ˉ¹²g。

2、線性范圍寬。

3、檢測(cè)快速。

4、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，價(jià)廉。

   

來(lái)源：http://www.fudizao.com